荧光光度法测定福建组培金线莲中总黄酮含量(2)
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2.2 实验条件选择
2.2.1 测定波长的选择 对槲皮素标准溶液及样品溶液进行激发光谱和发射光谱扫描，所得谱图如图1所示。槲皮素和样品在酸性条件下都与AlCl3反应产生荧光物质，激发波长(λex)分别为435 nm和433 nm，发射波长( a：HAc+AlCl3；b：样品+HAc+AlCl3；c：槲皮素+HAc+AlCl3
2.2.2 体系醋酸浓度 在槲皮素、三氯化铝条件不变的情况下，考察了体系中不同醋酸浓度对荧光强度的影响。由图2可知，在本实验中，当体系中醋酸的摩尔浓度较低时，随醋酸摩尔浓度的增大，荧光强度迅速增加，当加入醋酸的摩尔浓度达到0.05 mol/L时，荧光强度达到最大值，然后随着醋酸摩尔浓度的增大，荧光强度降低，故本实验确定加入HAc的量为使体系的醋酸浓度达到0.05 mol/L。
2.2.3 体系三氯化铝浓度 在槲皮素、HAc的条件不变的情况下，考察了体系中不同AlCl3浓度对荧光强度的影响。见图3。在本实验中，当体系中AlCl3的浓度较低时，随AlCl3浓度的增大，荧光强度增强，当加入AlCl3的浓度在0.6～0.7 mg/mL时，荧光强度达到最大值，而后随着AlCl3浓度的增加，荧光强度缓慢降低。故本实验选择加入AlCl3的量为使体系中AlCl3的浓度为0.6 mg/mL。
2.2.4 体系乙醇浓度 在槲皮素、HAc和AlCl3的条件不变的情况下，考察了不同浓度乙醇对荧光强度的影响。见图4。由图可知，乙醇的浓度对荧光强度的影响比较大，浓度越高，荧光强度越强，故本实验选择95%乙醇作为溶剂。
图4 乙醇浓度的影响
2.2.5 体系试剂加入顺序 按上述选定条件 ......
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